Trans Plus 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

制膠 蛋白質(zhì)生物學(xué) 試劑

• 價(jià)格￥690
• 規(guī)格1ml
• 貨號(hào)HKR063
• 單位支
• 品牌HaoKebio

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【產(chǎn)品信息】

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

Trans Plus 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的聚合物與核酸分子的帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后，與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。

本產(chǎn)品經(jīng)過本公司的優(yōu)化處理，具有轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，適用范圍廣等特點(diǎn)?

【儲(chǔ)存與運(yùn)輸】

藍(lán)冰運(yùn)輸， 4℃保存，有效期一年。（不可冰凍）

【使用方法】
使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請(qǐng)參考表 1）

1． 接種細(xì)胞

對(duì)于貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染前 18-24 h 進(jìn)行鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時(shí)的密度大約在 80%左右。對(duì)于懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染當(dāng)天，在配制 Trans-DNA 復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板，每 500 μL 生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入 4~8×105cells。

【注】：培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化最佳使用量。

2．準(zhǔn)備 Trans-DNA 復(fù)合物

(1) 對(duì)于每孔細(xì)胞，將 1 μg 質(zhì)粒 DNA 稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基（或OPTI-MEM I 培養(yǎng)基），混勻。

(2) 對(duì)于每孔細(xì)胞，將 3 μL Trans 轉(zhuǎn)染試劑稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基（或者 OPTI-MEM I 培養(yǎng)基），輕輕混勻。

【注】：無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基是稀釋液，不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行 DNA 和 Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因?yàn)?Trans-DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。

(3) 將稀釋好的 Trans 轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒 DNA 中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序不能反向進(jìn)行。

3．轉(zhuǎn)染細(xì)胞

(1) 將上述 80 μL Trans-DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或輕微振蕩，讓 Trans-DNA 復(fù)合物分散均勻。

(2) 在 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 6-18 h，去除含 Trans-DNA 復(fù)合物的培養(yǎng)液，更換新的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至對(duì)轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析。

【注意事項(xiàng)】

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2. 質(zhì)粒質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高純度無內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒。通過 260 nm 光吸收測(cè)定 DNA 濃度，260nm / 280 nm 比值確定 DNA 純度（比值應(yīng)該在 1.8～2.0 的范圍之內(nèi)）。如有可能，請(qǐng)通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。

3. 細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保細(xì)胞沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用李記生物的胎牛血清（貨號(hào)：AC03L055）培養(yǎng)細(xì)胞。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)液要求： Trans 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染，并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無血清培養(yǎng)基稀釋 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。確保細(xì)胞培養(yǎng)液沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)液中不添加抗生素。

5. 試劑用量的優(yōu)化：DNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，初次使用應(yīng)優(yōu)化 DNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA 使用 1～4 μL 體積 Trans 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的比例，通常推薦是 1:2~1:5。

表 1：不同培養(yǎng)體積對(duì)應(yīng)的待轉(zhuǎn) RNA、 Trans、稀釋液用量

使用時(shí) DNA（μg）: Trans 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（μL）比值保持在 1:2~1:5。