杭州浩克生物
五标预实验（固定panel）
1535【产品信息】 无 暂无
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【产品信息】
| 产品名称 | 产品货号 | 规格 | 价格 |
| BRDU检测（DAB） | HKF2035 | 张 | 45元 |
一、 实验原理
免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(IHC)或免疫细胞化学技术(ICC)。
二、 实验步骤
1. 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min -无水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min- 85%酒精6min，自来水洗2min。
2. 抗原修复：组织切片置于盛满xxxx抗原修复缓冲液（PH ）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min至沸，停火8min保温再转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4
）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3. 阻断内源性过氧化物酶：切片加上3%的双氧水，室温孵育25min，将玻片置PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4. 画圈：用组化专用的组化笔沿着组织外围轮廓画一个与组织间隔3-4毫米的小圈，然后加入足量的PBS保证后续依次加入的封闭血清，一抗，二抗，以及显色剂能完全覆盖组织，而不沿着玻片流走。
5. 血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。
6. 加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加按一定比例配好的对应一抗，切片平放于湿盒4°过夜孵育。
7. 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加相对应的二抗覆盖组织，室温孵育50min。
8. DAB显色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加（稀释液和浓缩液1000:50配制）新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，纯水冲洗切片终止显色。
9. 复染细胞核：苏木素染色2-3min左右，自来水洗，分化液分化2秒，自来水冲洗，返蓝液返蓝15-30s，流水冲洗。
10. 脱水封片：将切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min -95%酒精5min -无水乙醇5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min 中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片.
11. 显微镜镜检，图像采集分析。
三、 结果判读：
苏木素染出细胞核为蓝色，DAB显出的阳性表达为棕黄色
四、 注意事项：
1． 注意切片脱蜡是否彻底；
2． 实验过程中切片勿干片；
3. 实验操作中小心枪头挂伤组织。
