【产品信息】
| 产品名称 | 产品货号 | 规格 | 价格 |
| 免疫荧光（四标） | HKF2008 | 张 | 300元 |
石蜡切片免疫荧光实验报告
一、实验器材及试剂
- 实验器材
| 名称 | 厂家 | 型号 |
| 脱水机 | 湖北贝诺医疗科技有限公司 | JT-12S |
| 生物组织自动包埋机 | 湖北贝诺医疗科技有限公司 | JB-L5 |
| 转轮式切片机 | 徕卡显微系统上海有限公司 | HistoCoreBIOCUT |
| 石蜡包埋机（冷台） | 湖北贝诺医疗科技有限公司 | JB-L5 |
| KD-P组织摊片机 | 浙江金华科迪仪器设备有限公司 | 51A011 |
| 烤箱 | 天津市莱玻特瑞仪器设备有限公司 | GFL125 |
| 载玻片及盖玻片 | 江苏汇达医疗器械有限公司 | 710510 |
| 微波炉 | 美的 | M1-L213B |
| 脱色摇床 | 上海琪特分析仪器有限公司 | STS-3 |
| 涡旋仪 | 秒生科技有限公司 | SI-A256 |
| 移液枪 | Dragon | KE003068 |
| 组化笔 | Gene tech | GT1001 |
| 荧光显微镜 | NIKON | ECLIPSE C1 |
| 试剂 | 厂家 | 货号 |
| 无水乙醇 | 杭州宏达化工仪器有限公司 | SJ003614 |
| 二甲苯 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10023418 |
| 20x柠檬酸抗原修复液（PH6.0） | 杭州浩克生物技术有限公司 | HKI0003 |
| PBS缓冲液 | 杭州浩克生物技术有限公司 | |
| BSA | 杭州浩克生物技术有限公司 | HK5021 |
| 一抗：xxxx红+xxxx绿 | | |
| 二抗：HRP超敏山羊抗兔鼠通用二抗 | 杭州浩克生物技术有限公司 | HKI0029 |
| Flare520 | 杭州浩克生物技术有限公司 | HKI0014 |
| Flare570 | 杭州浩克生物技术有限公司 | HKI0015 |
| DAPI（即用型） | 杭州浩克生物技术有限公司 | HKI0005 |
| 抗荧光淬灭封片剂 | 杭州浩克生物技术有限公司 | HKI0007-1 |
- 石蜡切片免疫荧光实验步骤
- 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-无水乙醇Ⅰ6min -95%酒精6min-85%酒精6min蒸馏水洗。
- 抗原修复：组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复液（PH6.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min停火8min中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
- 阻断内源性过氧化物酶：切片加上3%的双氧水，室温孵育25min，将玻片置PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
- 血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。
- 加一抗：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加按一定比例稀的抗体覆盖组织。切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。
- 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。
- 信号放大:将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min 。滴加相对应颜色Flare信号放大试剂，3-5min.将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min 。双标或者多标的实验从这一步结束后重复步骤2-7，标记第二个、或者第三个抗体，最后在进入步骤8即可。
8、DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
9、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
10、镜检拍照：切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。
| Flare染料 | 激发波长 | 发射波长 |
| DAPI 蓝色 | 350 | 420 |
| Flare480青绿 | 450 | 480 |
| Flare520绿 | 490 | 520 |
| Flare570红 | 550 | 570 |
| Flare620橙 | 590 | 620 |
| Flare690粉 | 630 | 690 |
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